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T 細(xì)胞 ELISPOT 測定法檢測分泌細(xì)胞的細(xì)胞因子

更新時間:2023-06-14      點(diǎn)擊次數(shù):1079

T細(xì)胞ELISPOT測定易點(diǎn)測試

T 細(xì)胞 ELISPOT 測定是一種簡單靈敏的免疫測定法,用于在單細(xì)胞水平檢測分泌蛋白質(zhì)的 T 細(xì)胞。


U-CyTech生物科學(xué)提供廣泛的人,猴,小鼠和大鼠T細(xì)胞ELISPOT試劑盒,包括用于檢測細(xì)胞因子或顆粒酶產(chǎn)生細(xì)胞的試劑盒,如IFN-γ,IL-2,IL-4,IL-10,IL-17A,IL-21,GM-CSF,顆粒酶B和TNF-α。這些 ELISPOT 試劑盒有不同的形式(2 板或 5 板試劑盒),并配有酶著色劑(產(chǎn)生紅點(diǎn))。
猴子試劑盒中的抗體已被驗(yàn)證可用于檢測各種舊世界猴子的細(xì)胞因子產(chǎn)生細(xì)胞,包括恒河猴、豬尾獼猴、食蟹猴和狒狒。我們用于新世界猴的ELISPOT試劑盒已通過驗(yàn)證,可用于檢測狨猴的細(xì)胞因子。

此外,已經(jīng)開發(fā)了人類和猴子“ELISPOT"試劑盒,用于使用熒光標(biāo)記抗體(所謂的 氟斑).


T細(xì)胞ELISPOT測定的預(yù)期用途

ELISPOT檢測是需要監(jiān)測的靈敏的檢測方法之一 離體 單細(xì)胞水平的細(xì)胞免疫反應(yīng)。該測定可以準(zhǔn)確檢測T細(xì)胞響應(yīng)抗原釋放的分泌蛋白,例如細(xì)胞因子。測試中使用的細(xì)胞懸浮液可以來自血液(PBMC),淋巴,脾臟,骨髓或CNS組織。

經(jīng)典的 T 細(xì)胞監(jiān)測試驗(yàn)(例如混合淋巴細(xì)胞反應(yīng) [MLR] 和細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞 [CTL] 試驗(yàn))測量 CD4 +或 CD8 +  T 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。 MLR 和 CTL 檢測都有其缺點(diǎn),包括使用放射性、低通量篩選、低溫保存標(biāo)本的靈敏度降低和技術(shù)負(fù)擔(dān)。也可以使用 RT-PCR 分析來測量 T 細(xì)胞反應(yīng)。然而,該測定檢測的是 mRNA 而不是分泌的蛋白質(zhì)。

ELISPOT 檢測沒有這些缺點(diǎn),已證明比 ELISA 或細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色更靈敏。1-3 高靈敏度是由于板結(jié)合抗體在細(xì)胞釋放的分泌蛋白在細(xì)胞培養(yǎng)基中稀釋、與細(xì)胞表面受體相互作用或被蛋白酶降解之前直接捕獲細(xì)胞釋放的分泌蛋白。這一特性允許檢測極低頻率的細(xì)胞因子分泌細(xì)胞 (1/100,000),并且還提供了高通量篩選的可能性。

應(yīng)用

  • ELISPOT 檢測已被證明是一種靈敏的系統(tǒng),可用于監(jiān)測人類個體或動物的疾病進(jìn)展。多項(xiàng)研究表明,身體不同部位產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞頻率的變化充分反映了免疫功能的變化。4個

  • ELISPOT 檢測可能有助于了解新病毒引起疾病的情況下疾病的發(fā)展,以及早期疫苗開發(fā)研究,

  • ELISPOT 測定可用于分析 T 細(xì)胞反應(yīng)以預(yù)測同種異體移植排斥反應(yīng)。7

  • ELISPOT測定可用于確定接種疫苗的非人靈長類動物PBMC中抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)的頻率8,9 和免疫大鼠的脾臟細(xì)胞10 和老鼠11.

  • ELISPOT測定可能有助于更好地了解病原體如何逃避保護(hù)性免疫。12

  • ELISPOT測定已用于旨在誘導(dǎo)腫瘤特異性T細(xì)胞的疫苗接種試驗(yàn)過程中。13,14



流程圖 T 細(xì)胞 ELISPOT 檢測

T細(xì)胞ELISPOT程序的簡要說明

將細(xì)胞在涂有高親和力單克隆抗體的ELISPOT板的孔中孵育特定時間,孵育期間產(chǎn)生的細(xì)胞因子與該抗體結(jié)合。隨后,細(xì)胞被洗掉。用生物素化的抗細(xì)胞因子檢測抗體和酶標(biāo)記的鏈霉親和素的組合來檢測包被抗體捕獲細(xì)胞因子的區(qū)域。測定的最后一步是添加底物,產(chǎn)生一個彩色區(qū)域(“斑點(diǎn)"),揭示細(xì)胞因子分泌的部位。
T細(xì)胞ELISPOT程序的不同步驟在 T細(xì)胞ELISPOT檢測流程圖.

image.png

這是人類PBMC中T細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ和IL-2特異性斑點(diǎn)的一個例子。
該人肌內(nèi)注射了 病毒 mRNA 疫苗(加強(qiáng)疫苗接種)。用SARS-CoV-2肽庫刺激疫苗接種前后的PBMC,并在ELISPOT平板上孵育24小時(2x105 細(xì)胞/孔)


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