日本乱妇乱熟乱妇乱色a片,少妇和公翁系列小说,色情无码www视频无码区小黄鸭 ,咒术回战第二季免费观看

您好!歡迎訪問上海牧榮生物科技有限公司網(wǎng)站!
咨詢熱線

17621170138

當前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 成功傳代的方法——解離法

成功傳代的方法——解離法

更新時間:2023-08-24      點擊次數(shù):760

在開發(fā)特定細胞系的培養(yǎng)條件時需要考慮許多參數(shù)。我們都知道 pH 平衡、氧氣水平和血清濃度是影響培養(yǎng)成敗的重要變量。然而,包括與細胞需求相匹配的解離方法的傳代方案也同樣重要??紤]到這一點,我們將回顧一些常見解離實踐背后的原則,以幫助您根據(jù)細胞系的具體性質(zhì)定制方法。

懸浮生長的細胞易于傳代培養(yǎng)。只要在細胞耗盡營養(yǎng)供應之前將細胞稀釋到合適的新鮮培養(yǎng)基中,它們就會表現(xiàn)得很好。另一方面,單層生長的細胞彼此之間以及與培養(yǎng)皿之間形成蛋白質(zhì)接觸。在將細胞懸浮在培養(yǎng)基中、離心并重新鋪板之前,必須先將這些物質(zhì)破壞。因此,必須特別考慮以確保解離條件破壞細胞接觸而不殺死細胞。

胰蛋白酶有時(但并非總是)是答案

在決定解離條件時,研究者應考慮細胞形成的鍵的類型。一些貼壁細胞系僅形成微弱的接觸,只需將培養(yǎng)瓶敲擊手掌或?qū)⑴囵B(yǎng)瓶敲擊臺面即可破壞接觸。其他貼壁細胞系,特別是那些源自上皮的細胞系,會形成牢固的多蛋白緊密連接,只能通過酶消化來破壞;在這些情況下,通常使用胰蛋白酶(一種絲氨酸蛋白酶)。源自上皮的細胞還可以表達鈣粘蛋白,其介導非常強的鈣依賴性粘附或橋粒連接。在這種情況下,可能需要添加鈣螯合劑(如 EDTA)來隔離鈣,以有效地解離細胞。

優(yōu)化解離后的活力

為了優(yōu)化解離后的細胞活力,反應條件應與細胞接觸的強度相匹配。例如,如果標準胰蛋白酶/EDTA 消化(通常為 0.05%-0.5%)不能有效消化細胞鍵(10-15 分鐘內(nèi)),則可能很難在細胞開始死亡之前將其從平板上移除,并且細胞活力也會受到影響。將會受到不利影響。在這種情況下,可能需要更高濃度的胰蛋白酶/EDTA 或其他酶,例如膠原酶。另一方面,如果反應過于劇烈,細胞可能會裂解或失去重新附著到平板上所需的表面蛋白,這兩種情況都會導致活力降低。此外,裂解的細胞會釋放基因組 DNA,導致活細胞聚集,使存活細胞更難重新鋪板,因此需要添加 DNase。

準備是良好解離的關(guān)鍵

如果您已將反應強度與細胞系的粘附特性相匹配,但您的細胞仍然難以去除,您可能會發(fā)現(xiàn)問題在于細胞準備解離的方式。生長培養(yǎng)基中可能存在抑制胰蛋白酶的成分,例如血清,但這可以通過簡單地用Dulbecco PBS沖洗細胞一到兩次來克服 (不含鈣或鎂)在添加解離試劑之前。也可能是細胞保持匯合的時間太長。在這些條件下,細胞可能會形成異常牢固的細胞-細胞和細胞-表面連接,并且異常難以破壞。出于這個原因,以及為了培養(yǎng)物的整體健康,建議細胞在達到 100% 匯合(即 70-90% 匯合)之前進行傳代。

結(jié)論

有了對解離試劑如何工作的基本了解,研究人員可以開發(fā)一種優(yōu)化的方案,同時考慮細胞粘附特性的強度和質(zhì)量。細胞解離的優(yōu)化方案將確保成功傳代并延長細胞在培養(yǎng)物中的壽命。


掃一掃,關(guān)注微信
地址:上海市嘉定區(qū)安亭鎮(zhèn)新源路155弄16號新源商務(wù)樓718室 傳真:Shanghai Mulong Biotechnology
©2025 上海牧榮生物科技有限公司 版權(quán)所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備2022017655號-1
先锋影音亚洲中文字幕av| 肉乳床欢无码a片120秒厨房里 | 做床的全部过程视频| 被主人惩罚在惩戒室sm| 又大又粗又爽a级毛片免费看| 免费a级毛片在线播放不收费| 一区二区亚洲av天堂嫩模| 老熟女高潮喷水了| 公交车上拨开丁字裤进入电影| 我和漂亮的妽妽激情| 偷自视频区视频首页| 24小时免费b站观看直播| 国产精品a∨一区二区三区| 在线成人www免费观看视频| 色婷婷国产精品视频一区二区| 斗破苍穹年番在线观看免费 | 日本japanese丰满白浆| 金瓶梅在线播放| 人与禽性视频77777| 蜜桃色欲av久久无码精品| 国产精品一区二区久久| 成人欧美一区二区三区在线视频| 欧美色综合天天久久综合精品| 国产未成女一区二区三区| 香港三级伦在线播放| 羞答答的玫瑰静悄悄的开歌词| jizz日本| chinese熟女老女人hd| 强壮的公次次弄得我高潮a片日本| 国产边打电话边做对白在线| 国产人与zoxxxx另类| 亚洲成av人电影在线观看| 男人tv天堂精品一区二区| 欧美性色欧美a在线在线播放 | 日韩电影免费在线观看网址| 国产乱码精品一区二区三区中文| 杨门女将之浪荡合集| 国产偷国产偷亚洲高清app| 刺激的至亲乱45部| 女朋友水太多进去就软了| 白石茉莉奈av|