人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞（Y79）該細(xì)胞由Reid TW及其同事從病人右眼切除的腫瘤進(jìn)行原代培養(yǎng)建立而成，此病人有很強(qiáng)的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的母系家族遺傳性。

【細(xì)胞名稱】人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞

【細(xì)胞別名】y79；人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞

【組織來源】視網(wǎng)膜

【細(xì)胞形態(tài)】圓形、成簇細(xì)胞樣

【生長特性】懸浮生長

【培養(yǎng)體系】RPMI-1640+20%FBS+1%P/S

【傳代比例】1:2-1:3，每 2-3 天換液一次

【培養(yǎng)條件】氣相：95%空氣+5%二氧化碳，溫度：37℃

【凍存條件】凍存液：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO；存儲(chǔ)條件：液氮

【安全性】建議在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并做好個(gè)人防護(hù)。

【用途】僅供科研使用

二、復(fù)蘇及傳代方法

1、細(xì)胞株的復(fù)蘇（凍存管）

（1）將凍存管在37℃水浴鍋中迅速全融化，并適當(dāng)輕輕搖晃促融?？焖?、全融化可以提高細(xì)胞的復(fù)蘇效果。

（2）打開凍存管前時(shí)用75%酒精擦拭細(xì)胞凍存管外壁。

（3）將全融化的細(xì)胞直接離心，或者轉(zhuǎn)移至無菌15ml或其它合適無菌離心管中，400g離心5min，吸除上清，注意不要吸走細(xì)胞沉淀，然后用新鮮*全培養(yǎng)液重懸后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)器皿，混勻，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。

（4）第二天視貼壁或生長狀態(tài)，更換培養(yǎng)液。

注意：如果收到的凍存管不能及時(shí)進(jìn)行復(fù)蘇，還請置于-80℃或液氮中進(jìn)行暫存，并盡快復(fù)蘇進(jìn)行培養(yǎng)。

2、細(xì)胞株的復(fù)蘇（T25瓶）

（1）將收到T25瓶脫外包后用75%酒精擦拭瓶外壁。

（2）置于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，看是否有異常；無異常后，采用移液器移去多余的培養(yǎng)液，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)過夜。

（3）第二天視貼壁或生長狀態(tài)，考慮進(jìn)行換液或傳代，傳代比例參考1:2~1:4。

三、注意事項(xiàng)

1、每支凍存管約含1×106個(gè)細(xì)胞，體積為1ml，預(yù)期存活率60-90%，建議復(fù)蘇至1個(gè)T25瓶或1個(gè)6cm培養(yǎng)皿中。如果復(fù)蘇后存活率較低，可以消化后轉(zhuǎn)移至3.5cm培養(yǎng)皿/T12.5瓶中，這樣細(xì)胞生長會(huì)更好。

2、如果本產(chǎn)品是常溫運(yùn)輸，并且是培養(yǎng)瓶中充滿*全培養(yǎng)液的貼壁細(xì)胞，收到細(xì)胞后：

（1）及時(shí)拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。

（2）用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2~4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

（3）仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息。

（4）靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)。

3、如果細(xì)胞密度超過85%請盡快進(jìn)行傳代操作；如果懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中靜置過夜以使懸浮的細(xì)胞再次貼壁。如果收到的是常溫運(yùn)輸?shù)碾x心管裝的懸浮細(xì)胞，可以直接取出轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。若培養(yǎng)液顏色正常則保留培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，并且在*次更換培養(yǎng)液時(shí)，保留一半原培養(yǎng)液，并加入一半新鮮培養(yǎng)液，這樣可以盡量避免由于培養(yǎng)液或血清差異導(dǎo)致細(xì)胞生長的不適應(yīng)，確保細(xì)胞良好的生長狀態(tài)。

4、細(xì)胞培養(yǎng)請?jiān)谏锇踩衽_(tái)中進(jìn)行操作，并嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。

上海牧榮生物科技有限公司

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