MagVigen™ Whole Blood, PBMC or Cell Genomic DNA Extraction Kit

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產(chǎn)品內(nèi)容

• mag vigen DNA捕獲納米顆粒
• 裂解緩沖液
• 洗滌緩沖液
• 洗脫緩沖液
• 蛋白酶K溶液

需要但不包括的材料

• 磁性架(NVIGEN目錄號A20006)
• 異丙醇(分子生物學級)
• 乙醇(200度)
• 美國公共廣播公司

協(xié)議

注意:

• 制備清洗緩沖溶液:在每550 μl清洗緩沖儲備液中加入450 μl異丙醇，制成清洗緩沖液。
• 使用前充分渦旋珠子。
• 以下方案使用150 μl作為提取起始體積。對于其他體積，請按比例縮放每個步驟中使用的試劑。

1. 將150 μl樣品轉(zhuǎn)移到1.5ml Eppendorf試管中。如果樣品量較少，加入PBS補足體積。對于全血樣品，即從60 μl或75 μl樣品開始，用等體積的PBS稀釋。




2. 加入5 μl蛋白酶K溶液，加入150 μl細胞裂解緩沖液。輕輕混合均勻，并在55℃下孵育30分鐘




3. 向裂解緩沖液中加入5μl MagVigen DNA捕獲納米顆粒。渦旋混合均勻。向裂解反應(yīng)中加入300 μl異丙醇，渦旋混合。室溫下孵育20分鐘。




4. 將樣本管放在磁性架上沉淀珠子，直到溶液澄清(約5分鐘)。慢慢取出并丟棄上清液。注意不要帶走任何珠子，盡可能多地移除溶液。




5. 從磁鐵上取下樣本管，加入150 μl清洗緩沖液。通過移液或倒置混合。短暫旋轉(zhuǎn)，使溶液到達試管底部。在磁性架上沉淀珠子，直到溶液澄清(大約1-3分鐘)，然后去除上清液并丟棄。




6. 添加150μl 80%乙醇(清洗2)，通過移液混合。短暫旋轉(zhuǎn)，使溶液到達試管底部。在磁性架上沉淀珠子，等到溶液澄清，去除上清液并丟棄。




7. 重復步驟6，用80%乙醇再次清洗(清洗3)。




8. 將樣本管放在磁性架上，風干顆粒約1分鐘。




9. 向珠子中加入50 μl洗脫緩沖液，并充分混合。室溫下孵育1分鐘。




10. 將樣本管放置在磁性支架上1-2分鐘。小心地從Eppendorf管底部收集洗出液，不要擾動沉淀。




11. 重復步驟9和10進行另一次洗脫。洗出液含有提取的DNA。

注意: 對于要求高樣品清潔度的下游應(yīng)用，將樣品放在磁鐵旁邊，以消除殘留珠子的可能性。

表1。每個步驟中使用的試劑體積。

MagVigen™ Whole Blood, PBMC or Cell Genomic DNA Extraction Kit